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      快速通用Hifair? V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG Plus)
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
      產(chǎn)品簡介
      


       
      


      Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以 RNA 為模板進(jìn)行多重定量 PCR 反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量 PCR 在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡化了實(shí)驗(yàn)操作，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
      


      本試劑盒利用耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一鏈 cDNA，并利用 UNICON® HotStart Taq DNA 
      


      Polymerase 進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，緩沖液中已含有 Mg2+ 和 dNTPs, 以及有效抑制非特異性 PCR 擴(kuò)增的因子和提升多重 qPCR 反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠在保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)。此外，該預(yù)混液添加了 dUTP/UDG 系統(tǒng)，可有效防止氣溶膠污染。
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號(hào)
      
			      		
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      13650ES50
      

			
      (50 T)
      
			      		
			
			
      13650ES60 (100 T)
      
			      		
			
			
      13650ES80 (1000 T)
      
			      		
			
			
      13650ES92 (10000 T)
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      13650-A
      
			      		
			
			
      2×Hifair® V C58P2 MP Buffer
      
			      		
			
			
      750 μL
      
			      		
			
			
      1.5 mL
      
			      		
			
			
      15 mL
      
			      		
			
			
      150 mL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      13650-B
      
			      		
			
			
      Hifair® V C58P2 Enzyme Mix
      
			      		
			
			
      60 μL
      
			      		
			
			
      120 μL
      
			      		
			
			
      1.2 mL
      
			      		
			
			
      12 mL
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      組分信息
      


       
      


      【注】1. 2×Hifair® V C58P2 MP Buffer 為Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的簡寫,其中包含dNTPs,dUTP, Mg2+ , stabilizers等。
      


      2. Hifair® V C58P2 Enzyme Mix 主要包含有耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase, UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, RNase inhibitor, UDGase。
      


       
      


      儲(chǔ)存條件
      


       
      


      -25~-15℃保存，有效期18個(gè)月。
      


       
      


      使用說明
      


       
      


        
	
      1. 反應(yīng)體系（以30 μL為例）
        2. 

      


      
	
		
      
			
			
      組分
      
			      		
			
			
      體積（μL） 
      
			      		
			
			
      終濃度
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      2×Hifair® V C58P2 MP Buffer
      
			      		
			
			
      15
      
			      		
			
			
      1×
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Hifair® V C58P2 Enzyme Mix
      
			      		
			
			
      1.2
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Primer/Probe Mix (2.5 μM)
      
			      		
			
			
      3
      
			      		
			
			
      0.25 μM
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      模板RNA
      
			      		
			
			
      1-10
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNase Free H2O
      
			      		
			
			
      to 30
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
      


        
	
      1. 引物探針混合液濃度：Primer/Probe Mix 中包含多對(duì)引物和探針，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進(jìn)行調(diào)整；探針終濃度也可以根據(jù)對(duì)熒光曲線和熒光增峰的要求在 0.05-0.5 μM 范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。
        2. 
	
      2. 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
        3. 
	
      3. 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭；避免交叉污染和氣溶膠污染。
        4. 

      


        
	
      1. 參考擴(kuò)增程序
        2. 

      


      
	
		
      
			
			
      循環(huán)步驟
      
			      		
			
			
      溫度
      
			      		
			
			
      時(shí)間
      
			      		
			
			
      循環(huán)數(shù)
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      逆轉(zhuǎn)錄
      
			      		
			
			
      50℃a
      
			      		
			
			
      20 min
      
			      		
			
			
      1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      預(yù)變性
      
			      		
			
			
      95℃
      
			      		
			
			
      5 min
      
			      		
			
			
      1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      擴(kuò)增反應(yīng)
      
			      		
			
			
      95℃
      
			      		
			
			
      15 sec
      
			      		
			
			
      40-45 cycles
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      60℃b
      
			      		
			
			
      30 secc
      
			      		
		
      
	      

      


      【注】a. 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者55℃均可。
      


      b. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。
      


      c. 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
      


        
	
      1. 適用機(jī)型
        2. 

      


      ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
      


      Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
      


      Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
      


      Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
      


      Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
      


      Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
      


      Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.
      


       
      


      注意事項(xiàng)
      


       
      


      1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)使用RNase free耗材。
      


      2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
      


       
      


      Ver.CN20241108
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883