Hieff NGS? 1st Strand Synthesis Kit 一鏈合成試劑盒
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff NGS® 1st cDNA Synthesis Kit可用于全長一鏈cDNA的合成。其產(chǎn)物可以經(jīng)過二鏈cDNA的合成后，直接進(jìn)行測(cè)序接頭的連接，構(gòu)建測(cè)序文庫。
產(chǎn)品組分
| 組分編號(hào)和名稱 | 12249ES08 | 12249ES24 | 12249ES96 | |||
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12249-A |
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Random Primer |
16 μL |
48 μL |
192 μL |
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12249-B |
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1st Strand Enzyme Mix |
16 μL |
48 μL |
192 μL |
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12249-C |
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10×1st Reaction Buffer |
16 μL |
48 μL |
192 μL |
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運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸，-20°C存放。效期1年。
注意事項(xiàng)
1. 請(qǐng)使用無RNase污染的耗材，并對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
2. 建庫需要的其他試劑需自備或另外購買。
3.本產(chǎn)品僅用作科研用途！
使用方法
Step 1 RNA變性
1. 將 Random Primer 室溫解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。按照表1配置反應(yīng)液：
表1 RNA預(yù)變性反應(yīng)體系
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名稱 |
體積（μL） |
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Random Primer |
2 |
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RNA |
14 |
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Total |
16 |
2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。于PCR儀上進(jìn)行如下反應(yīng)：（熱蓋80℃）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。
Step 2 第一鏈cDNA的合成（1st Strand Synthesis）
1. 將第一鏈合成試劑從-20°C取出，室溫解凍，顛倒混勻后瞬離。按表2所示，配制第一鏈cDNA合成的反應(yīng)液。
表2 第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系
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名稱 |
體積（μL） |
|
變性的RNA |
16 |
|
10×1st Reaction Buffer |
2 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
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Total |
20 |
2.使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。于PCR儀上進(jìn)行如下反應(yīng)：（熱蓋105℃）25℃，5 min；37℃，45 min；85℃，5 s；4℃，hold。
3. 產(chǎn)物可直接用于二鏈cDNA的合成或于-80℃暫存。
HB220401
